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细胞增殖及活性检测

         细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂系列过程。其中核DNA的复制倍增是整个过程的重要特征。细胞增殖检测技术广泛应用于分子生物学遗传学肿瘤生物学免疫学药理和药代动力学等研究领域。
         检测细胞存活与增殖的方法主要包括观察DNA合成含量和检测细胞代谢活性两种，前者主要有Brdu、EDU检测等，后者主要有MTT、CCK8等检测，客户可根据处理药物数量等因素选择合适的检测方法。

BrdU检测原理

 用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。. 细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量 (如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定)，从而判断细胞的增殖能力。

EDU检测原理

EDU（5-Ethyny1-2'-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，与Apollo荧光染料特异性反应检测细胞增殖情况。这是一种新型的非放射性同位素细胞增殖检测的方法，在细胞培养、实体组织及临床研究中得到了广泛的应用。该技术可用于细胞成像、流式、细胞示踪、DNA损伤修复检测、线粒体活性检测以及病毒增殖活性检测等，EdU亦适用于活体注射。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，EdU检测法更简单、更快速、更准确，不需要严苛的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。

近年来，EdU标记技术在检测细胞增殖的实验中发挥了重要作用，使用范围越来越广泛。

MTT试剂盒

MTT试剂盒中含有MTT（化学名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐），外源性MTT能够被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为深紫色结晶甲瓒，该产物不溶于水，会沉积在细胞中，而死细胞无此功能。加入特定溶剂后，甲瓒可以被完全溶解，然后通过酶标仪测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，对应的吸光度越高；细胞毒性越大，对应的吸光度越低。

CKK-8试剂盒

CCK-8（Cell Counting Kit-8）试剂盒广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测。本试剂中含有WST-8（化学名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在条件下，可被线粒体内的脱氢酶还原为橙色甲瓒产物Formazan，该产物具有高度水溶性，生成的Formazan数量与活细胞数量成正比。检测速度快且灵敏度高于任何其它四唑盐，如MTT、XTT或MTS。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

CCK-8试剂盒，不需配制，无需换液，步骤便捷，灵敏度高。同MTT相比对细胞无明显毒性，一般状况下对细胞形态没有明显的改变，因此加入CCK-8溶液显色后，可选择不同时间点反复用酶标仪读板，找到实验最佳测定时间。