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细胞表型分析

流式细胞术免疫表型包括分析异质细胞群，以便识别感兴趣的细胞群。

免疫表型可涉及多种细胞类型。以下部分简单介绍人外周血淋巴细胞亚群分析和人间充质干细胞MSC鉴定。

外周血淋巴细胞亚群分析

外周血淋巴细胞根据生物学功能和细胞表面抗原表达分为3个群：T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK淋巴细胞【自然杀伤细胞（natural killer)，CD3-CD16+和/或CD56+】。T细胞又分为辅助T细（CD3+CD4+）和抑制T细胞（CD3+CD8+)。

       淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等，分析发病机制，观察疗效及检测预后有重要意义。

图中分析了CD3+T细胞、CD19+B 细胞、CD16/56+NK细胞，以及CD3+CD4+Th细胞、CD3+CD8+Tc细胞。

人外周血淋巴细胞亚群分析，多色实验能得到各个亚群细胞的百分比。

T淋巴细胞百分率或计数绝对值可用于区别和监测某些免疫缺陷病和自身免疫性疾病。

      辅助T淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制患者。

      抑制T淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。抑制T细胞百分率在一些免疫性疾病表现出超出正常参考范围，在许多先天性或获得性免疫缺陷病人中升高（如重症综合性免疫缺陷SCID,AIDS）。

      CD4+/CD8+>2.5表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自身免疫反应，见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。CD4+/CD8+<1.4称为免疫抑制状态，常见于（1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于0.5；（2）恶性肿瘤；（3）再生障碍性贫血、白血病；（4）某些病毒感染；CD4+/CD8+降到1.0以下为“倒置”，是较为明显的异常，若移植后CD4+/CD8+较移植前明显增加，则可能发生排斥反应。

       在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚群数值都有异常，其特征是患者体内CD3+细胞、CD4+细胞明显减少，而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显著降低，说明肿瘤患者的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。骨髓造血细胞的增殖和分化障碍也与T细胞亚群异常有关。如在再生障碍性贫血与粒细胞减少症中，患者的外周血CD4+细胞数减少，CD8+细胞数增多，CD4+/CD8+比值明显下降。

       NK细胞介导某些肿瘤和病毒感染细胞的细胞毒性反应。

       B淋巴细胞为体液免疫的重要指标。

人间充质干细胞MSC鉴定

间充质干细胞是1987年由Friedenstein等人利用自然贴壁法从获得的骨髓基质细胞中发现的。间充质干细胞（MSCs）的概念最早在1991年由Caplan提出。

MSCs这一类群细胞的异质性比较大，故无法定MSCs的发育起源。比如牙髓、皮肤等属于外胚层来源，骨髓、脂肪组织、围产期组织等则属于中胚层来源。

间充质干细胞广泛存在于人体各组织中，可来源于骨髓，胰腺，皮肤肺等多处器官组织。也在许多其他的组织中发现有间充质干细胞的存在，在滑膜、肝脏、肺脏、牙周质、胰腺、眼结膜、脂肪、肌腱、甚至在羊水及头皮组织中均可以培养出间充质干细胞。

自1991年MSCs的概念提出之后，在接下来的十年内报告MSCs的组织类型激增。这就需要对MSCs的定义有一个明确的标准。

2006年，国际细胞疗法协会（ISCT）制定了MSCs的定义的基本标准，也是MSC最低的鉴定标准：

在标准体外培养条件下呈贴壁生长状态。

大于或等于95%的细胞表达CD105、CD73和CD90，且表达CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19或HLA-Ⅱ类分子的细胞不应超过总数的2%

在体外诱导条件下，具有分化为成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞的能力。

该标准存在的缺陷是对其在体内实验是否能真正分化未做要求，也没有检验其干性是否能维持。

不同来源的MSCs分子特征差异巨大[3]。Caplan建议将其改为医用信号细胞 (medicinal signaling cells，MSCs)。

人间充质干细胞MSC鉴定。一般CD90、CD44、CD73、CD105阳性，CD34、CD45为阴性，符合MSC表型特征。