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核内转录因子检测

1. 制备单细胞悬液。

2. 细胞活性染料染色细胞。

3. 进行细胞表面染色。

4. 最后一次洗涤后，弃上清，并脉冲式涡旋样本，直到细胞团块完 全分离。通常残留液量大约为 100ul。

5. 每管加入 1mL 1X Foxp3 固定 / 破膜缓冲液并脉冲式涡旋。

6. 2-8°C 或室温避光孵育 30-60 分钟。（小鼠样本可在 2-8°C 避光 贮藏 18 小时）。

7. 每管加入 2mL 1X 破膜液，室温 400-600xg 离心 5 分钟，弃上清。

8. [ 可选 ] 重复第 7 步。

9. 在残留的 1X 破膜液中重悬细胞。倒出上清液后大约残留 100ul。

10. [ 可选 ] 向细胞中加入 2% 正常小鼠 / 大鼠血清进行封闭，室温孵 育 15 分钟。

11. 不用洗涤，向细胞中加入荧光直标抗体，室温避光孵育至少 30 分钟。

12. 每管加入 2mL 1X 破膜液，室温 400-600xg 离心 5 分钟，弃上清。

13. 重复第 12 步。

14. 加入适量的流式细胞染色缓冲液重悬染色的细胞。

15. 使用流式细胞仪分析样本