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CBA多因子检测

微球免疫分析系统CBA (Cytometric Bead Array)是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。
细胞因子检测技术包括免疫学方法、流式细胞技术、分子生物学及蛋白组学技术,通常使用酶联免疫分析技术ELISA来的定血清或血浆中的细胞因子,但是Elisa方法每次仅能测定一项细胞因子,而且每次所需要的样本来那个为1000µl的血清或血浆。要想获得多个细胞因子的结果,采血量就必须很多。
流式CBA技术可以实现对稀有样本、少量样本的细胞因子、抗体、抗原等多个指标的检测。流式细胞仪以其检测速度快、检测手段灵活、多指标、多参数、灵敏度高等特点已经成为基础科研、临床检测等必不可少的技术手段。


【技术原理】

CBA是种结合流式细胞仪荧光检测和微球免疫分析的应用技术,可以轻 松的在短时间内,同时检测多种蛋白,其作用原理利用荧光强度不同的微 球,上面带有可以辨认特定蛋白的抗体(capture antibody ),与样本(例 如血清、血浆、培养上清液、细胞裂解液等)及PE检测抗体(detection antibody)作用后,以流式细胞仪进行分析,根据PE荧光强度的不同用 FCAP Array软件进行分析和标准品做比对后,可进行样本内特定,蛋白的 定性或定量。


(1)采用聚苯乙烯荧光微球连结特定的捕获抗体,捕捉待测物。每个CBA微球大小一致,具有特定的荧光强度,包被有适用于特定分析(如其它抗体或者可溶性蛋白)的特异性捕获抗体(Capture Antibody),提供了类似ELISA孔板的捕获表面;
(2)当微球和待测细胞因子样品溶液混合后,微球上的特异性抗体就与样品(血清、血浆或者细胞培养液)中相应的抗原或蛋白结合,然后加入荧光标记的检测抗体,就会形成“三明治”夹心复合物;
(3)最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。
CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光,在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性;检测抗体带有PE荧光素标记,在流式细胞仪的FL2通道检测,通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。


【样本类型】

血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等各种液相样本。


【应用领域】

(1)细胞因子、炎症影子、趋化因子、酶等的浓度检测;
(2)细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析;
(3)肿瘤研究;
(4)免疫疾病或传染疾病的辅助诊断和监控;
(5)药效评价、药物研发;
(6)疫苗研究;
(7)总体免疫功能分析等。


【技术优势】

1、样本量少灵敏度高:每次检测仅需25-50ul 样本;灵敏度可达 0.274pg/mL,

2、实验步骤简便:时间快速,仅需3-4小时,快速上样,
3、弹性设计实验:最多可同时测定30种蛋白,实验可重复性高,
4、结果分析容易利用FCAP Array软件,不论样本数目多少,可快速分析完成分析。


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