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RNeasy Plus Universal Mini Kit (50)(73404)

Performance

RNeasy Plus Universal操作流程可从各种类型的组织中得到高品质RNA，重复性好，适用组织包括脂肪组织和不易裂解的组织（参见下表）。不同物种和不同发育阶段的组织的纯化产量不同，尤其是脂肪组织。

RNeasy Plus Universal Kits纯化得到总RNA的产量

大鼠/小鼠组织(10 mg)

总RNA产量 (µg)

脂肪组织     0.5–2.5    

脑    5–20    

心脏    5–25    

肠    10–60    

肾    5–40    

肝    15–80    

肺    5–15    

肌肉    5–35    

皮肤    2–5    

脾    15–100    

使用real-time RT-PCR和QIAxcel体系分析纯化得到的RNA，表明这些RNA具有较好的完整性（参见"High-quality RNA"）。gDNA Eliminator Solution和RNeasy技术可高效去除大部分基因组DNA污染，无需进行DNase处理（参见"Effective removal of genomic DNA"）。

Principle

RNeasy Plus Universal操作流程可从各种类型组织中纯化RNA，包括脂肪或不易裂解的组织。RNeasy Plus Universal Kits整合了苯酚/胍裂解技术和硅胶膜总RNA纯化技术。试剂盒中的QIAzol Lysis Reagent是一种由苯酚和硫氰酸胍组成的单相溶液，专为方便的裂解各种组织设计，并能抑制RNases的活性。高效的裂解以及通过有机抽提去除污染物，使RNeasy离心柱可用于处理更大量的组织。gDNA Eliminator溶液能有效去除基因组DNA污染，非常有助于DNA分离到中间相。

Procedure

RNeasy Plus Universal操作流程易于进行，与苯酚/氯仿处理后回收相比，此方法更快、更有效，能得到更高纯度和产量的RNA（参见"RNeasy Plus Universal Mini and Midi procedures"）。RNeasy Plus Universal Mini Kit可从50 mg组织中纯化RNA；RNeasy Plus Universal Midi Kit可从250 mg组织中纯化RNA。

可使用TissueRuptor、TissueLyser LT或TissueLyser II在QIAzol Lysis Reagent中进行样本匀浆。加入gDNA Eliminator Solution和氯仿后，匀浆离心分为水相和有机相。收集含有RNA的上层水相，加入乙醇，使用RNeasy离心柱纯化RNA。总RNA结合到离心柱膜上，苯酚和其他污染物被高效洗去。获得的高品质RNA可用RNase-free水洗脱下来。

该实验方案适用于富集mRNA，不包括大部分小于200 nt的RNAs（如rRNAs和tRNAs）。RNeasy Plus Universal操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化包含miRNA等小RNAs的总RNA。

Applications

RNeasy Plus Universal Kits纯化得到的RNA非常适用于对少量DNA敏感的下游应用，如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。